大花蕙兰离体快速繁殖方法，其方法为：（１）在１～３月上旬，取大惠兰新芽，经灭菌，接种到固体培养基上，获得试管苗；（２）切去试管苗根系，取基部小切块，接种在固体培养基上培养约一个月，诱导出原球茎，将原球茎取下，在原部位继续产生新原球茎；（３）原球茎在液体和固体培养基上交替培养，快速增殖形成原球茎团；（４）将原球茎切开，转接到固体培养基上分化植株，再从基部切下，转接到固体培养基上培养约一个月，形成完整植株即可移载到大棚或温室。本发明成活率高、不受季节限制、效果稳定、成本低、出现变异机率小。
作者用不同浓度的大量元素及NAA和BA的组合来研究大花惠兰的繁殖系数.试验结果表明:以2MS+BA 1.0mg/L照+NAA 0.2mg/L+糖20mg/L+琼脂7g/L为分生培养基,有利于提高大花惠兰的繁殖系数,以1/ 2M S+BA 0.3mg/L+NAA 0.7mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L为生根培养基,生根率可达84.1 %.大花惠兰离体培养研究发现繁殖用最佳培养基配方为2 MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.2 mg/L+琼脂7g/L,生根用最佳培养基配方为1/ 2M S+BA 0.3mg/L+NAA 0.7mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L.在大花蕙兰组培快繁过程中,植物激素对原球茎的诱导、增殖及幼苗的分化有显著影响.细胞分裂素6-BA和生长素NAA最佳配比对大花蕙兰组织培养很重要,尤其是细胞分裂素影响较大.
采用大花蕙兰的试管苗和原球茎作材料.以MS培养基或1/ 2M S为基本培养基,比较不同浓度的BA对大花蕙兰试管苗和原球茎增殖的影响,以及不同浓度的NAA对大花蕙兰试管苗生根的影响.试验结果表明:大花蕙兰原球茎增殖与分化的最佳培养基为(1/ 2M S+NAA 0.2mg/L+BA 1.0 mg/L),原球茎增殖率达363.16%,芽分化率达到68.42%;其试管苗增殖的最佳培养基为(MS+NAA 0.2mg/L+香蕉汁100g/L+BA 0.5mg/L),芽增殖率达到91.67%;大花蕙兰试管苗生根的最佳培养基为(1/ 2M S+NAA 0.5mg/L),平均每株生根数为2.60条.
以大花蕙兰试管苗基部切块为外植体,以MS培养基为基本培养基,培养诱导类原球茎(PLB),研究不同激素配比以及外植体来源基因型对PLB诱导的影响.低水准的2,4-D和较高水准的6-BA对于试管苗基部切块诱导PLB具有显著的促进作用.当2,4-D浓度高于0.60 mg·L-1时,PLB诱导受到显著抑制.不同基因型有不同的最佳激素组合.NAA对特定基因型诱导PLB有效.以试管苗基部切块组织培养方式诱导大花蕙兰PLB是可行的,为转基因研究提供了植株再生技术基础.
取大花蕙兰的腋芽为材料,对大花蕙兰一步成苗的组培快繁技术进行了研究.结果表明:Ms+6-BA 1 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/ L+琼脂7 g/L是大花蕙兰一步成苗的最适培养基,增殖的同时可获得健壮的再生植株.
在大花蕙兰组培快繁过程中,细胞分裂素BA和KT对类原球茎诱导有极显著影响,ZT的作用不明显;BA和生长素NAA均对类原球茎的诱导和增殖起明显的促进作用,且BA对大花蕙兰幼苗的增殖效果更为显著.类原球茎诱导分化过程中所需的蔗糖浓度相对较低.GA和香蕉泥的合理组配是大花蕙兰生根壮苗的关键.试验结果表明,大花蕙兰试管苗玻璃化的原因主要有3个:一是培养温度的突然升高,造成高温伤害的后遗症,引发玻璃化;二是经过多次继代培养,原球茎过多吸收细胞分裂素6-BA,使体内激素比例严重失调,导致玻璃化;三是长期使用氨、锰、铁、锌等含量较低的……
以大花蕙兰(Cymbidium)试管苗为试验植物材料,以树脂膜容器(CP)和玻璃培养瓶作为培养容器,比较不同培养方式对大花蕙兰试管苗生长的影响.结果表明,与常规玻璃培养容器相比,以岩棉块作为培养基支持体,并配合CP使用的培养方式(CP·RW)对促进大花蕙兰试管苗生长效果显著.以野生春兰(Cymbidium goeringii)为母本,大花蕙兰(C.hybridium)为父本进行杂交,由杂交种子获得800多个春兰×大花蕙兰杂种原球茎无性系.其中一个杂种株系的原球茎继代培养2个月后,形成肉眼可见的花蕾.诱导花芽形成的最适激素组合为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L,总花芽形成率达31%.诱导花芽形成的最适材料为1～2cm幼苗,花芽形成率达19%.
大花蕙兰组培苗落地前炼苗3～5天,可提高成活率6.7%～13.4%,不同栽培基质影响大花蕙兰组培苗的落地成活率,水苔是较为理想的移栽基质,其移栽后3个月成活率达86.7%.瓶苗移栽后浇水时切忌过干或过湿,等新根长出每周宜进行一次根外追肥.
利用组织培养技术对大花蕙兰的芽进行诱导,从4种培养基中筛选出1/ 2M S+NAA 0.4 mg/L+6-BA 1.5 mg/L的培养基为最优的芽诱导培养基.同时,利用不同基质和营养液进行试管苗的移栽和速生栽培,得出以苔藓为移栽基质的大花蕙兰的成活率最高,达100%.无土栽培中用大量元素为Ca(NO3 )2 472 mg/L+KNO3 809 mg/L+(NH4)2HPO4 153 mg/L+MgSO4 493 mg/L的营养液配方浇灌大花蕙兰,明显促进大花蕙兰的生长.
应用组织培养和快速繁殖技术对最适大花蕙兰培养的培养基、激素、培养方式、培养基质等进行了筛选.结果表明,在含有2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤的改良MS培养基中,以液体振荡培养最有利于原球茎的增殖;改良MS培养基+ 0.3mg/L萘乙酸有利于试管苗的生根;在腐殖土:棉子壳=3:2(体积比)下移栽的成活率最高.
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